【摘要】目的构建携带增强绿色荧光蛋白基因的人14—3—3盯真核表达载体pEGFP—GV142-SFN并转染至人乳腺癌MCF-7细胞，鉴定所表达的蛋白活性。方法通过逆转录-聚合酶链反应从胎脑组织中获得编码14—3—3σ的全长eDNA，定向克隆至真核表达载体GV142中，鉴定正确后与带有增强绿色荧光蛋白的pEGFP—N1-SFN酶切后连接，重组携带14—3—3σ的表达载体pEGFP—GV142-SFN。将pEGFP—GV142-SFN质粒转染至乳腺癌McF-7细胞，观察荧光蛋白的表达。结果经限制性内切酶酶切分析、聚合酶链反应和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒，荧光显微镜下观察发现：转染24h后，乳腺癌MCF-7细胞内可见增强绿色荧光蛋白表达，48h表达最稳定，72h可见荧光蛋白淬灭，细胞形态逐渐消失。结论成功构建了14—3—3σ真核表达载体pEGFP—GV142-SFN并转染至乳腺癌MCF-7细胞．观察和检测到绿色荧光蛋白表达。