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EZH2的小干扰RNA真核表达载体的构建及其在膀胱癌T24细胞
【作者】 王海峰 ; 杨宏 ; 胡礼炳 ; 雷永虹 ; 秦扬 ; 李俊 ; 毕城伟 ; 霍倩
【关键词】 EZH2 膀胱肿瘤 RNA干扰
【摘要】 目的构建EZH2的小干扰RNA(siRNA2)真核表达载体质粒,获得稳定表达干扰质粒的膀胱癌细胞系,并探讨EZH2在膀胱癌中的作用。方法通过合成特异性沉默EZH2的siRNA2片段,获得pEGFP-C1-siEZH2表达载体;脂质体介导重组质粒转染T24细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测转染后细胞系T24 EZH2的表达。结果经测序证明重组载体构建成功,稳定转染siRNA2的T24细胞EZH2的mRNA和蛋白水平均较空白对照组下降(P<0.01)。结论成功构建EZH2的siRNA2真核表达载体,获得EZH2稳定沉默的T24细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的膀胱癌基因治疗奠定实验基础。
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