35 现在的位置:首页 > 期刊导读 > 2015 > 35 >

PAX2稳转细胞系构建及对细胞迁移和侵袭能力的作用研究

【作者】 李里 [1] ; 宫亮 [2] ; 吴玉斌 [3]

【关键词】 PAX2基因 细胞侵袭 细胞运动 肾小管 上皮细胞 大鼠

摘要】目的探讨PAX2稳转细胞系构建及生物学作用。方法选择处于对数生长期大鼠肾小管上皮细胞,实验分为稳转组、空载组、对照组。稳转组采用阳离子脂质体转导将p EGFP-PAX2转入大鼠肾小管上皮细胞,空载组采用同样方法配置空载质粒转染溶液,对照组不添加质粒转染溶液。经G418筛选,建立稳定转染细胞系。通过细胞划痕实验及Transwell实验检测PAX2稳转细胞系的细胞迁移率及细胞侵袭作用。结果应用G418筛选14 d,稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出,建立PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系。稳转组在荧光显微镜下可见绿色荧光,基因融合表达获得成功。稳转组细胞PAX2条带密度与β-action吸光度比值为(1.00±0.04),空载组为(0.83±0.03),对照组为(0.85±0.04),3组吸光度比值比较,差异有统计学意义(F=398.7,P〈0.05);其中稳转组吸光度比值高于空载组和对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。细胞划痕后18 h,对照组、空载组和稳转组细胞迁移率分别为(39.34±5.34)%、(40.56±7.54)%和(83.72±7.12)%,3组细胞迁移率比较,差异有统计学意义(F=431.8,P〈0.05);其中稳转组细胞迁移率高于对照组和空载组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。各组细胞培养48 h后,对照组、空载组和稳转组迁移细胞分别为(23.33±3.63)、(22.00±8.14)、(45.67±7.14),3组迁移细胞数比较,差异有统计学意义(F=248.5,P〈0.05);其中稳转组迁移细胞数高于对照组和空载组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论 p EGFP-PAX2质粒成功转染大鼠肾小管上皮细胞,并成功筛选出高效稳定表达PAX2的稳转细胞系。PAX2稳转增加了肾小管上皮细胞的迁移及侵袭能力。

上一篇:1,25-二羟维生素D_3对人系膜细胞增殖作用的影响
下一篇:骨质疏松性椎体压缩骨折不同时期保守和微创治疗的疗效比较

中国全科医学杂志社 版权所有   冀ICP备12018774号
 地址:北京市西城区广义街5号广益大厦A907    邮政编码:100053