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miR-142-3p通过靶向CD133抑制鼻咽癌细胞和鼻咽癌干细胞生长的效果研究

【作者】 汤国辉 张志伟 黄卫国 谢运杰 刑佼涛 贺修胜    南华大学附属南华医院肛肠科 湖南省衡阳市421002 南华大学肿瘤研究所 湖南省衡阳市421001

【关键词】 鼻咽肿瘤 肿瘤干细胞 细胞增殖 细胞侵袭

摘要】目的明确miR-142-3p能否通过靶向CD_(133)的表达进而抑制鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力,探讨miR-142-3p在抑制肿瘤生长中的分子机制。方法于2015年7月—2016年9月,构建CD_(133)mRNA 3'-UTR荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告系统观察miR-142-3p对CD_(133)mRNA 3'-UTR荧光素酶活性的影响。将对照control、CD_(133)siRNA及miR-142-3p模拟物各40μmol/L分别转染至鼻咽癌CNE2细胞,采用Western blotting法检测其对CD_(133)表达水平的影响;设立阴性对照组[瞬时转染对照control(40μmol/L)]、阳性对照组[瞬时转染CD_(133)siRNA(40μmol/L)]、miR-142-3p组[瞬时转染miR-142-3p模拟物(40μmol/L)]、联合组[瞬时共转染miR-142-3p模拟物(40μmol/L)和pc DNA3.1(+)-CD_(133)0.8μg],MTS法检测4组对CNE2细胞增殖活性的影响,Transwell法检测4组对CNE2细胞侵袭能力的影响,干细胞成球实验检测阴性对照组和miR-142-3p组对CNE2干细胞成球能力的影响。结果单光子荧光素酶活性检测结果显示,无miR-142-3p转染的p CD_(133)-Wt型细胞荧光素酶活性为(0.924±0.107),miR-142-3p转染的p CD_(133)-Wt型细胞荧光素酶活性为(0.535±0.035),两者比较,差异有统计学意义(t=7.924,P=0.022)。Western blotting法检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组、miR-142-3p组CD_(133)表达水平比较,差异有统计学意义(F=12.44,P〈0.05);其中阳性对照组和miR-142-3p组CD_(133)表达水平低于阴性对照组(P〈0.05)。阴性对照组、阳性对照组、miR-142-3p组、联合组CNE2细胞数量比较,差异有统计学意义(F=16.78,P〈0.05);其中阳性对照组和miR-142-3p组CNE2细胞数量低于阴性对照组(P〈0.05)。Transwell侵袭实验检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组、miR-142-3p组、联合组穿过基质胶的CNE2细胞数量比较,差异有统计学意义(F=13.19,P〈0.05);其中阳性对照组和miR-142-3p组穿过基�

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