六味地黄丸含药血清对β-淀粉样蛋白损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的保护作用研究

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【作者】宋军营 [1] 袁永 [1] 王丛笑 [2] 张钟允 [1] 宫洪涛 [3] 张振强 [1] 刘文弟 [1] 高爱社

【关键词】阿尔茨海默病六味地黄汤血管内皮生长因子类淀粉样β肽类

【摘要】目的研究六味地黄丸含药血清(MSLDP)对β-淀粉样蛋白(Aβ) 25-35损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的保护作用,探讨六味地黄丸在防治阿尔茨海默病(AD)中的作用机制.方法 2012年3月-2013年4月选取SPF级雄性SD大鼠20只,按照随机数字表法将20只雄性SD大鼠分为对照组、给药组,每组10只.制备MSLDP及Aβ25-35母液备用.根据Aβ25-35、MSLDP不同干预浓度将处于对数生长期PC12细胞分为0、10、20、40 μmol/LAβ25-35组和0％、2.5％、5.0％、10.0％、20.0％、30.0％ MSLDP组,另取处于对数生长期PC12细胞分为正常对照组(不加Aβ25-35和MSLDP)、模型组(加入20 μmol/L Aβ25-35制备AD模型)、MSLDP干预组(加入20％ MSLDP+ 20 μmol/L Aβ25-35),显微镜下观察0％、2.5％、5.0％、10.0％、20.0％、30.0％MSLDP组及正常对照组、模型组、MSLDP干预组PC12细胞形态.采用MTF法检测PC12细胞存活率,同上分组方法及步骤采用Western blotting法检测PC12细胞血管内皮生长因子B(VEGF-B)蛋白表达水平.结果 0μmol/L Aβ25-35组PC12细胞存活率高于10、20、40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05);10 μmol/L Aβ25-35组PC12细胞存活率高于20、40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05);20 μmol/L Aβ25-35组PC12细胞存活率高于40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05).0、10 μmol/L Aβ25-35组VEGF-B蛋白表达水平高于20、40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05);20μmol/L Aβ25-35组VEGF-B蛋白表达水平高于40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05).0％ MSLDP组PC12细胞存活率低于2.5％、5.0％、10.0％、20.0％、30.0％ MSLDP组(P＜0.05);2.5％ MSLDP组PC12细胞存活率低于5.0％、10.0％、20.0％、30.0％ MSLDP组(P＜0.05);5.0％ MSLDP组PC12细胞存活率低于10.0％、20.0％、30.0％MSLDP组(P＜0.05);10.0％ MSLDP组PC12细胞存活率低于20.0％、30.0％ MSLDP组(P＜0.05).20.0％ MSLDP组PC12细胞存活率低于30.0％ MSLDP组(P＜0.05).显微镜下示0％ MSLDP组PC12细胞形态规则,大小均一;2.5％、5.0％ MSLDP组PC12细胞数目增多,形态正常;10.0％ MSLDP组PC12细胞聚集成片状生长;20.0％、30.O％MSLDP组PC12细胞聚集成片状生长,边缘长出小的棘突,具有分化趋势.0％、2.5％、5.0％ MSLDP组VEGF-B蛋白表达水平低于10.O％、20.0％、30.0％ MSLDP组(P＜0.05);10.0％ MSLDP组VEGF-B蛋白表达水平低于20.0％MSLDP组(P＜0.05);20.0％ MSLDP组VEGF-B蛋白表达水平高于30.0％ MSLDP组(P＜0.05).正常对照组、MSLDP干预组PC12细胞存活率高于模型组(P＜0.05).显微镜观察示正常对照组细胞形态规则,大小均一;模型组细胞数量减少,形态不规则,呈凋亡或死亡的萎缩状,有细胞碎片;MSLDP干预组细胞数量明显增多,部分细胞呈拉伸状有棘突.正常对照组VEGF-B蛋白表达水平高于模型组和MSLDP干预组(P＜0.05);模型组VEGF-B蛋白表达水平低于MSLDP干预组(P＜0.05).结论 MSLDP可增加Aβ25-35损伤的PC12细胞的活性,并对PC12细胞具有保护作用,其机制可能与其可增加VEGF-B蛋白表达水平有关.

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