Let-7b对骨髓基质干细胞诱导分化为神经元的作用研究
【作者】
李进领
[1]
李智
[2]
李琳
[1]
张静
[3]
贾延劼
[3]
安颖
[1]
【关键词】
神经元
干细胞 骨髓
慢病毒属
Let-7b
细胞分化
【摘要】目的 探讨Let-7b在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元过程中的作用.方法 2013年1--12月将80只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、阴性对照组、Let-7b-up慢病毒载体(LV-rno-Let-7b-up)组、Let-7b-inhibition慢病毒载体(LV-rno-Let-7b-inhibition)组,每组20只.将阴性对照组、LV-rno-Let-7b-up组、LV-rno-Let-7b-inhibition组大鼠分别感染EGFP空病毒,采用颈椎脱臼法处死4组大鼠,并获取MSCs,传代培养4代后备用.取传代培养的MSCs感染慢病毒,具体为:空白对照组、阴性对照组不进行感染,LV-mo-Let-7b-up组、LV-rno-Let-7b-inhibition组分别感染LV-rno-Let-7b-up、Let-7b-inhibition,采用MTr法检测感染前、感染后24 h、感染后5 d MSCs存活率.采用法舒地尔对4组进行诱导实验,观察MSCs分化为神经元的分化效率.采用免疫组化法检测4组神经元烯醇化酶(NSE)、神经微管结合蛋白(MAP-2)、微管相关蛋白(Tau)水平,RT-PCR法检测4组NSE、MAP-2、Tau mRNA水平.结果 LV-rno-Let-7b-up组MSCs于LV-mo-Let-7b-up感染后第3天荧光表达最强,LV-mo-Let-7b-inhibition组MSCs于LV-rno-Let-7b-inhibition感染后第5天荧光表达最强.感染第5天时,阴性对照组、LV-mo-Let-7b-up组、LV-rno-Let-7b-inhibition组MSCs感染率分别为87.46%、86.81%、87.12%.感染后24 h、5d阴性对照组、LV-mo-Let-7b-up组、LW-rno-Let-7b-inhibition组MSCs存活率低于空白对照组(P<0.05);阴性对照组、LV-rno-Let-7b-up组、LW-rno-Let-7b-inhibition组感染后5 d MSCs存活率高于感染后24 h(P<0.05).阴性对照组和空白对照组部分MSCs呈现神经元样改变;LV-roo-Let-7b-up组极大部分MSCs出现典型的神经元样结构;LV-rno-Let-7b-inhibition组仅有少量MSCs出现典型的神经元样结构.LV-mo-Let-7b-up组NSE、MAP-2、Tau及其mRNA水平高于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);LV-rno-Let-7b-inhibition组NSE、MAP-2、Tau及其mRNA水平低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05).结论 感染LV-mo-Let-7b-up后大鼠MSCs分化为神经元的分化效率增加,提示Let-7b可促进MSCs向神经元分化.
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