重组慢病毒携带酪氨酸羟化酶对大鼠帕金森病模型的干预研究

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【作者】董小林战丽萍邬刚李青芸魏欢李建辉李妍平

【关键词】帕金森病酪氨酸单氧化酶慢病毒属基因治疗

【摘要】目的利用携带大鼠酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组慢病毒,对大鼠帕金森病模型进行基因治疗,评估基因疗法对帕金森病症状缓解和黑质神经元恢复的影响.方法 2014年11月—2015年12月,分离、培养和鉴定胎鼠原代神经元,抽提胎鼠原代神经元RNA、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆大鼠TH(rTH)基因,将rTH基因构建至慢病毒质粒,包装rTH重组慢病毒.采用实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光实验和Western blotting法体外检测大鼠成纤维细胞REF中rTH基因表达.通过脑内立体定位注射6羟多巴胺(6-OHDA)建立大鼠帕金森病模型,给予Lv-rTH重组慢病毒(Lv-rTH治疗组)、未携带基因的慢病毒Lv-NC(Lv-NC治疗组)及0.9%氯化钠溶液(对照组)注射大鼠纹状体和黑质.通过阿扑吗啡诱发旋转实验进行行为学评分,免疫组化进行神经元恢复评分.结果成功分离、培养了胎鼠原代神经元,成功克隆了rTH基因,并将rTH基因构建至慢病毒质粒,实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光实验和Western blotting法检测大鼠成纤维细胞REF中均表达rTH基因.3组大鼠治疗前1周自发旋转速率比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组大鼠治疗0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周自发旋转速率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中治疗0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周,Lv-NC治疗组和Lv-rTH治疗组大鼠自发旋转速率较对照组增快(P<0.05);治疗2、3、5、6、8、9、10周,Lv-rTH治疗组大鼠自发旋转速率较Lv-NC治疗组减慢(P<0.05).Lv-NC治疗组和Lv-rTH治疗组大鼠中脑黑质TH阳性神经元所占比例较对照组降低, Lv-rTH治疗组大鼠中脑黑质TH阳性神经元所占比例较Lv-NC治疗组升高(P<0.05).结论通过脑内立体定位注射,将表达rTH基因的重组慢病毒递送至帕金森病大鼠纹状体和黑质能缓解帕金森病症状并恢复TH阳性神经元.

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