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应用载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞H—ras^Val12的表达

【作者】 孟繁杰 ; 曹斌 ; 冯增利 ; 王海刚 ; 马顺茂 ; 赵文增 ; 尹东剑

【关键词】 RNA干扰 肝肿瘤 短发夹RNA

摘要】目的观察载体介导的RNA干扰(RNAi)技术对肝癌细胞突变的H—ras““。表达的抑制作用。方法将针对突变H—ras的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体转染肝癌细胞株BEL7402和SMMC7721,用免疫印迹(Westernblot)法检测H—ras蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。计量资料比较采用t检验;计数资料比较采用,检验。结果(1)转染前、后SMMC7721的H—ras蛋白表达量[光密度值分别(17524-21)和(1736±28)]比较,差异无统计学意义(t=0.474,P=0.646);而转染了Hl—sbRNA的BELT402的H—ras蛋白表达量(9204-11)与转染前(1221±11)比较,差异有统计学意义(t=20.126,P〈0.01);转染了H2一shRNA的BEL7402的H—ras蛋白表达量(872±10)与转染前(1201±10)比较,差异有统计学意义(t=23.477,P〈0.01)。H1一shRNA组和H2一shRNA组H—ras蛋白表达下调了62.8%和63.4%。(2)流式细胞仪检测表明,BEL7402转染H1一shRNA质粒后细胞凋亡率(47.7%)与转染H2一RNA质粒后细胞凋亡率(49.3%)比较,差异无统计学意义(z。=0.005,P=0.94);但均高于BELT402转染对照质粒后细胞凋亡率(30.2%),差异有统计学意义(疋2。。=6.810,P〈0.01;Y2。::6.103,P〈0.01)。结论载体介导的RNAi技术可有效特异抑制肝癌细胞突变的H—ras“”表达,对野生型的H—ras表达无影响。

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