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小干扰RNA对椎间盘炎症大鼠神经生长因子的影响研究

【作者】 王刚

【关键词】 RNA 小分子干扰 神经生长

摘要】目的探讨小干扰RNA(siRNA)对炎性因子IL-6、IL-1β诱导椎间盘大鼠神经生长因子(NGF)的抑制效应,为椎间盘源性腰痛(DLBP)的治疗提供新靶点。方法选择SPF级Sprague-Dawley(SD)火鼠60只,分离椎间盘髓核和纤维环细胞,将大鼠分为对照组(n=12)和实验组(n=48),实验组中分别加入10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L的IL-6及IL-1β共培养48h,每个亚组12只。将NGF-siRNA导入共培养细胞,导入NGF-siRNA前后以流式细胞仪测定细胞转化率,计算NGF-siRNA细胞转化率;采用实时Q-PCR检测导入NGF-siRNA前后的NGFmRNA表达,计算NGFmRNA相对表达量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测导人NGF-siRNA前后细胞液NGF浓度。结果流式细胞仪检测结果显示,NGF-siRNA细胞转化率为99.8%。导入NGF-siRNA前,10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L组NGFmRNA相对表达量均较对照组上调,分别上调3.4、3.7、4.7、8.0倍(P〈0.05);导入NGF-siRNA后,各组NGFmRNA相对表达量均较导人前下调,分别下调39.5%、45.5%、45.3%、39.9%、47.8%(P〈0.05)。导入NGF-siRNA前,10nmol/L、20nmol/L、50nmoL/L、100nmol/L组细胞液NGF浓度均较对照组升高,分别升高2.9、3.3、4.5、7.4倍(P〈0.05);导人NGF-siRNA后,各组细胞液NGF浓度均较导人前降低,分别降低47.2%、33.8%、35.4%、43.0%、54.9%(P〈0.05)。结论炎性因子IL-6及IL-1β可诱导体外培养的大鼠椎间盘细胞表达NGF,且其诱导效应与IL-6及IL-1β呈剂量依赖性;NGF-siRNA能够抑制炎性因子IL-6及IL-1β对椎间盘细胞NGF的诱导效应,为DLBP的治疗提供了新靶点。

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