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白假丝酵母菌最优化 RNA 提取策略的探索

【作者】 李赛男 ; 祁文瑾

【关键词】 白假丝酵母菌 RNA 聚合酶

摘要】目的:探索白假丝酵母菌总 RNA 简单、快捷、高效的提取方法。方法选取昆明医科大学第一附属医院妇产科门诊2011年7月—2013年3月有临床症状且阴道分泌物镜检阳性的外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者的白假丝酵母菌40株,选用不同时间与温度组合下的4种溶壁酶(Lyticase)破壁方案(A 方案:37℃、12 h,B 方案:25℃、12 h,C 方案:37℃、24 h,D 方案:25℃、24 h)进行 RNA 提取,将所得 RNA 进行荧光定量 PCR(qPCR)反应验证 RNA 的浓度及纯度,并进行管家基因18S rRNA 的检测。结果 D 方案提取获得的 RNA 浓度高于 A、B、C 方案(P <0.05);B 方案提取获得的 RNA 浓度高于 A、C 方案(P <0.05);而 A、C 两方案提取获得的 RNA 浓度比较,差异无统计学意义(P >0.05)。B、D 方案获得的 RNA 纯度高于 A、C 方案(P <0.05);但 A、C 方案获得的 RNA 纯度比较,差异无统计学意义(P >0.05);B 方案提取获得的 RNA 纯度高于 D 方案(P <0.05)。A、B、C、D 方案提取的 RNA 扩增产物 Ct 转化值比较,差异有统计学意义(P <0.05);其中 B、D 方案 qPCR 扩增产物 Ct 转化值高于 A、C方案(P <0.05);但 B、D 方案及 A、C 方案之间的 qPCR 扩增产物 Ct 转化值比较,差异无统计学意义( P >0.05)。管家基因18S rRNA 的引物扩增出的产物片段大小为150 bp。结论以 Lyticase 破壁提取白假丝酵母菌具有简单易行及RNA 产量高、纯度好的优点,值得临床推广应用。

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