蟾蜍灵抑制Raf/MEK/细胞外信号调节激酶信号通路活化影响人食管鳞癌细胞增殖及迁移机制研究
【作者】
丁妍
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王小玲
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邓会岩
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苏丽宏
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张培
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刘月平
【关键词】
食管肿瘤
蟾蜍灵
丝裂原活化蛋白激酶
细胞增殖
细胞运动
【摘要】目的探讨蟾蜍灵通过抑制人食管鳞癌细胞Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的活化从而影响人食管鳞癌细胞增殖及迁移的作用机制。方法培养人食管鳞癌细胞株TE13,分为对照组、不同浓度蟾蜍灵组(蟾蜍灵10 nmol/L组、蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组、蟾蜍灵100 nmol/L组)、UO126组和蟾蜍灵100nmol/L+UO126组,采用Western blotting方法和免疫细胞化学方法分别检测各组Raf-1、磷酸化Raf-1(p-Raf-1)、MEK、磷酸化MEK(p-MEK)、ERK、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达量和阳性表达率。划痕实验和Boyden小室实验检测各组细胞的迁移距离和穿过滤膜的细胞数量。结果蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-Raf-1、p-ERK表达量低于对照组(P〈0.05);蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-MEK表达量低于对照组(P〈0.05);蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组p-Raf-1、p-MEK、p-ERK表达量低于UO126组(P〈0.05)。蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-Raf-1、p-ERK阳性表达率低于对照组(P〈0.05);蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-MEK阳性表达率低于对照组(P〈0.05);蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组p-Raf-1、p-MEK、p-ERK阳性表达率低于UO126组(P〈0.05)。划痕实验结果显示,蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组细胞迁移距离短于对照组(P〈0.05);蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组细胞迁移距离短于UO126组(P〈0.05)。Boyden小室实验结果显示,蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组穿过滤膜的细胞数量少于对照组(P〈0.05);蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组穿过滤膜的细胞数量少于UO126组(P〈0.05)。结论蟾蜍灵可下调细胞内p-Raf-1、p-MEK、p-ERK表达量,提示蟾蜍灵可能是通过抑制Raf/MEK/ERK信号通路活化这一过程而发挥作用,从而抑制人食管鳞癌细胞的生长。�
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